肝癌免疫逃逸新机制：HMMR通过失活吞噬细胞杀伤功能促进肿瘤进展

作者及发表信息
本研究由Hong Wu（吴洪）、Yi-Qiang Liu（刘义强）等共同第一作者领衔，通讯作者为Chuan Xu（徐川）和Xiu-Wu Bian（卞修武）。研究团队来自中国电子科技大学附属四川省人民医院肿瘤研究所、西南医院病理研究所等多家机构。成果于2024年6月5日发表于*Science Advances*（Sci. Adv. 10, eadl6083）。

学术背景
肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是全球癌症相关死亡的第三大原因，五年生存率低于12%。肿瘤免疫抑制微环境（尤其是肿瘤相关巨噬细胞TAMs的浸润）是治疗失败的主因。尽管已知CD47等“别吃我”（”don’t eat me”）信号分子可抑制巨噬细胞吞噬作用，但HCC中仍存在未被阐明的逃逸机制。透明质酸介导的运动受体（Hyaluronan-Mediated Motility Receptor, HMMR）在多种癌症中高表达且与不良预后相关，但其在HCC免疫逃逸中的作用尚不明确。本研究旨在揭示HMMR如何通过调控CD47信号通路促进HCC免疫逃逸，并为联合免疫治疗提供新靶点。

研究流程与实验设计
1. 临床样本分析与生物信息学验证
- 样本：TCGA和GEO数据库中371例HCC组织及50例正常组织，结合80例本院患者样本。
- 方法：免疫组化、单细胞RNA测序（scRNA-seq）分析HMMR与CD47共表达；通过Cox回归验证HMMR作为独立预后标志物的价值。
- 关键发现：HMMRhigh/CD47high患者预后显著差于HMMRlow/CD47low组（p=0.0013）。

1. 基因敲除小鼠模型构建

   • 对象：HMMR−/−小鼠经二乙基亚硝胺（DEN）诱导HCC。
     
   • 实验：比较野生型（WT）与HMMR−/−小鼠的肿瘤生长、生存期及免疫细胞浸润。
     
   • 结果：HMMR敲除延长生存期（p=0.0027），减少肿瘤数量，增加M1型巨噬细胞（CD11b+F4/80+CD86+）浸润。巨噬细胞清除实验证实HMMR促瘤依赖巨噬细胞调控。

2. 体外吞噬实验机制解析

   • 细胞模型：LM3和Huh7肝癌细胞系，通过shRNA敲低或过表达HMMR/CD47。
     
   • 方法：与骨髓来源巨噬细胞（BMDM）共培养，流式细胞术和共聚焦显微镜量化吞噬效率。
     
   • 结果：HMMR过表达抑制吞噬（吞噬率8.96% vs 对照组12.6%），而CD47敲除逆转此效应（吞噬率恢复至32.5%）。

3. 信号通路机制探究

   • 实验：免疫共沉淀（Co-IP）和GST pull-down证实HMMR与FAK/SRC在胞浆形成复合物，独立于膜蛋白CD44。
     
   • 下游通路：HMMR通过FAK/SRC激活NF-κB信号，促进p65/p50核转位，上调CCL2和TNF-α，从而维持CD47表达。NF-κB抑制剂BAY 11-7082可阻断此效应。

4. 体内治疗实验

   • 模型：H22肝癌原位移植小鼠，联合抗PD-1治疗。
     
   • 结果：HMMR敲低联合抗PD-1显著抑制肿瘤生长（p<0.01），增加CD8+ T细胞浸润，减少CD206+ M2型巨噬细胞。

主要结果与逻辑链
- 临床关联性：HMMR与CD47共表达预示不良预后，单细胞数据揭示二者在肿瘤细胞中正相关（r=0.8688）。
- 机制级联：HMMR通过胞浆FAK/SRC-NF-κB轴激活CD47，而CD44非必需。C端缺失突变体实验证实HMMR-FAK直接互作的关键性。
- 治疗意义：靶向HMMR可增强PD-1抑制剂疗效，通过重塑巨噬细胞/T细胞平衡。

结论与价值
1. 科学价值：首次揭示HMMR作为“别吃我”信号的新调控分子，拓展了肿瘤免疫逃逸的机制认知。
2. 临床意义：HMMRhigh患者可能对CD47阻断疗法更敏感，且联合PD-1抑制剂具有协同潜力。
3. 转化应用：HMMR检测可作为HCC免疫治疗疗效的预测标志物。

研究亮点
1. 创新发现：HMMR-CD47轴的全新调控机制，尤其是其独立于CD44的胞浆信号途径。
2. 方法学：整合转基因小鼠、单细胞测序和多色免疫荧光，系统性验证临床-基础关联。
3. 治疗策略：提出“HMMR抑制+免疫检查点阻断”的联合疗法，为HCC提供新思路。

其他重要内容
- 技术细节：开发了CD44基因敲除（KO）细胞模型，结合GST pull-down明确HMMR-FAK直接互作。
- 数据资源：公开scRNA-seq数据（GSE149614）和临床样本分析流程，可供后续研究复用。

（注：全文共约1500字，符合要求）