该文档属于类型a，即报告了一项原创研究。以下是针对该研究的学术报告：
作者及机构：
本研究的主要作者包括Jingyi Chen、Yusong Chen、Fenglan Feng、Cheng Chen、Haikang Zeng、Shuai Wen、Xin Xu、Jianxing He和Jin Li。他们来自广州医科大学附属第一医院胸外科、国家呼吸疾病临床研究中心以及呼吸疾病国家重点实验室。该研究发表于《Journal of Thoracic Disease》2018年12月刊。
学术背景：
该研究属于肿瘤免疫治疗领域，特别是针对非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer, NSCLC）的细胞免疫治疗。尽管手术切除、靶向治疗和辅助治疗等积极手段已被广泛应用，但NSCLC患者的5年总生存率仍然较低，仅为约15%。近年来，基于细胞免疫的治疗方法，如细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-Induced Killer, CIK）和自然杀伤细胞（Natural Killer, NK）疗法，显示出一定的临床潜力。然而，免疫检查点阻断剂（如PD-1/PD-L1抑制剂）与CIK或NK细胞联合使用的效果尚未明确。因此，本研究旨在探讨PD-1/PD-L1阻断剂是否能够增强CIK和NK细胞对NSCLC的抗肿瘤效果，并明确其作用机制。
研究流程：
研究分为多个步骤，包括CIK和NK细胞的体外扩增、PD-1/PD-L1阻断剂的联合培养、细胞毒性实验、细胞表型分析、动物模型验证等。
1. CIK细胞的生成与PD-1阻断剂的联合培养：
- 从健康供体的外周血单核细胞（PBMCs）中分离CIK细胞，通过IFN-γ、抗CD3单克隆抗体和IL-2的刺激进行扩增培养。
- 在培养过程中，分别在第6、10、11天加入不同浓度的PD-1单克隆抗体（1、2、4 μg/mL），观察其对CIK细胞表型和功能的影响。
2. NK细胞的生成与PD-L1阻断剂的联合培养：
- 从健康供体的外周血中分离NK细胞，通过抗CD16单克隆抗体和IL-2的刺激进行扩增培养。
- 在培养过程中，分别在第11、12、13天加入不同浓度的PD-L1单克隆抗体（1、2.5、5 μg/mL），观察其对NK细胞功能的影响。
3. 细胞毒性实验：
- 使用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验评估CIK和NK细胞对NSCLC细胞株（如H1975）的杀伤效果。
- 通过流式细胞术检测CD107a和IFN-γ的表达，评估细胞毒性相关的分子标记。
4. 动物模型验证：
- 建立NSCLC小鼠模型，分别注射CIK细胞、CIK细胞联合PD-1阻断剂，观察肿瘤生长抑制效果。
- 通过免疫荧光染色和流式细胞术分析小鼠脾脏和肿瘤组织中CIK细胞的表型变化。
主要结果：
1. CIK细胞与PD-1阻断剂的联合效果：
- 在体外实验中，CIK细胞联合PD-1阻断剂显著增强了对H1975细胞的杀伤效果，杀伤率从单独使用CIK细胞的8.84%提升至86.35%。
- CD3+CD56+细胞的比例在联合培养6天后显著增加，表明PD-1阻断剂促进了CIK细胞的扩增和功能。
- 在小鼠模型中，CIK细胞联合PD-1阻断剂显著抑制了肿瘤生长，且脾脏中CD3+CD56+细胞的比例和CD107a表达均显著提高。
2. NK细胞与PD-L1阻断剂的联合效果：
- 在体外实验中，NK细胞联合PD-L1阻断剂在特定条件下（5 μg/mL，24小时）表现出最高的细胞毒性，但总体效果与单独使用NK细胞相比并无显著优势。
- PD-L1阻断剂对NK细胞的表型（如NKG2D表达）影响较小，表明其抗肿瘤作用主要通过其他机制实现。
结论：
研究表明，CIK细胞联合PD-1阻断剂能够显著增强对NSCLC的抗肿瘤效果，而NK细胞联合PD-L1阻断剂的效果则相对有限。这一发现为NSCLC的细胞免疫治疗提供了新的思路，特别是通过优化CIK细胞的治疗方案，可能为患者带来更好的临床效果。此外，研究还为未来探索PD-1/PD-L1阻断剂与其他免疫细胞（如T细胞和NK细胞）的联合应用提供了实验依据。
研究亮点：
1. 重要发现：首次系统评估了PD-1/PD-L1阻断剂与CIK/NK细胞联合使用对NSCLC的抗肿瘤效果，明确了CIK细胞联合PD-1阻断剂的显著优势。
2. 方法创新：通过优化CIK和NK细胞的培养条件，结合流式细胞术和动物模型验证，全面分析了细胞表型和功能的变化。
3. 研究意义：为NSCLC的免疫治疗提供了新的实验依据，并为未来临床研究提供了重要的参考。
其他有价值的内容：
研究还探讨了PD-1/PD-L1阻断剂对CIK和NK细胞表型的影响，发现PD-1阻断剂显著增加了CD3+CD56+细胞的比例，而PD-L1阻断剂对NK细胞的表型影响较小。这一发现为进一步研究免疫检查点阻断剂的作用机制提供了重要线索。
以上是该研究的详细报告，涵盖了研究背景、流程、结果、结论及其科学价值。