这篇文档属于类型a，是一篇关于T细胞受体（TCR）靶向KRAS G12V新抗原的原创研究论文。以下是详细的学术报告：

作者及发表信息

本研究由Meiying Shen（第一作者）及团队完成，合作单位包括重庆医科大学第一附属医院乳腺甲状腺外科、重庆医科大学基础医学院免疫学系等。论文于2025年7月发表在期刊Journal for Immunotherapy of Cancer（J Immunother Cancer 2025;13:e011863），标题为《Therapeutic potential of T-cell receptor targeting the HLA-A*11:01-restricted KRASG12V neoantigen without cross-recognition of the self-antigen RAB7B in solid tumors》。

学术背景

研究领域：肿瘤免疫治疗，聚焦于T细胞受体工程化T细胞（TCR-T）靶向公共新抗原（public neoantigens）的临床转化。
科学问题：KRAS突变是多种实体瘤的常见驱动突变，但其衍生新抗原的免疫原性和TCR开发面临两大挑战：
1. HLA结合稳定性差异：不同HLA分子对KRAS突变肽的呈递效率参差不齐；
2. 脱靶风险：部分TCR可能交叉识别自身抗原（如RAB7B），导致安全性隐患。
研究目标：筛选HLA-A*11:01限制性KRASG12V特异性TCR，并验证其抗肿瘤活性与安全性。

研究流程与方法

1. HLA-新抗原结合特性分析

• 实验设计：构建HLA+ TAP1− K562细胞模型，评估KRAS、TP53、PIK3CA突变肽与HLA-I类分子（如HLA-A*11:01、HLA-C*08:02）的结合亲和力与复合物半衰期。
  
• 关键方法：
  
  • 肽-HLA结合稳定性检测：通过流式细胞术监测肽-HLA复合物的解离动力学，结合NetMHCstabPan算法预测。
    
  • 结果：KRASG12V 9肽（KRASG12V[9]）与HLA-A*11:01的结合半衰期最长（约5小时），显著优于其他HLA类型（如HLA-C*08:02的1小时）。
    

2. TCR克隆筛选与功能验证

• TCR来源：从HLA-A*11:01阳性健康供体的初始T细胞库中，通过KRASG12V[9]肽负载的树突状细胞（mo-DCs）扩增抗原特异性T细胞。
  
• 筛选流程：
  
  • 单细胞分选与测序：鉴定出4个新型TCR克隆（KT18-KT21）和2个KRASG12V[10]特异性TCR（KT25-KT26）。
    
  • 功能验证：
    
  • Jurkat细胞模型：表达TCR的Jurkat细胞在KRASG12V[9]刺激下高表达CD69（EC50≤1 nM），且不识别野生型KRAS肽。
    
  • 交叉反应性检测：X-scan肽库扫描发现所有TCR均不同程度识别自身抗原RAB7B13-21，但KT18在生理浓度下无脱靶活性。
    

3. 体外与体内抗肿瘤评估

• 体外实验：
  
  • 细胞毒性：KT18 TCR-T细胞对HLA-A*11:01+ KRASG12V突变肿瘤细胞（如COR-L23、SW480）的杀伤效率达80%（效靶比10:1）。
    
  • 安全性测试：通过15种HLA-A*11:01+非突变细胞系和166种同源肽迷你基因簇验证KT18无脱靶反应。
    
• 体内实验：
  
  • 小鼠模型：NOG小鼠皮下移植HLA-A*11:01+ COR-L23或KRASG12V转导的HCC827肿瘤，注射KT18 TCR-T细胞后肿瘤完全消退（p<0.001）。
    

4. 数据分析与算法

• NetMHCstabPan：预测肽-HLA结合稳定性，与实验数据高度一致。
  
• X-scan分析：通过替换肽序列每个氨基酸生成突变库，绘制TCR识别模式热图，结合ScanProsite工具扫描人类蛋白质组预测脱靶肽。
  

主要结果

1. HLA-A*11:01是KRASG12V的理想呈递分子：其结合稳定性优于其他HLA亚型（如HLA-C*08:02），为TCR靶向提供结构基础。
   
2. TCR克隆的功能异质性：KT18在高效杀伤肿瘤（IFN-γ分泌EC50=0.3 nM）的同时，规避了RAB7B交叉识别，而KT19等高亲和力TCR则存在安全性风险。
   
3. 临床前验证：KT18 TCR-T细胞在多种实体瘤模型中实现持久肿瘤消退，且未观察到对正常组织的毒性。
   

结论与价值

科学意义：
- 首次揭示KRASG12V[9]-特异性TCR普遍存在RAB7B交叉识别，提出胸腺选择（thymic selection）可能是其发育机制。
- 确立HLA结合稳定性为TCR靶点筛选的关键指标。

应用价值：
- KT18 TCR可作为“即用型”疗法，适用于21%的东亚HLA-A*11:01阳性KRASG12V突变患者。
- 为其他公共新抗原（如TP53、PIK3CA突变）的TCR开发提供安全性评估范式。

研究亮点

1. 创新方法：结合X-scan与免疫肽组学（immunopeptidomics）系统性预测脱靶风险。
   
2. 临床转化潜力：KT18是目前唯一报道的兼具高活性（肿瘤清除）与高安全性（无RAB7B脱靶）的KRASG12V特异性TCR。
   
3. 跨学科整合：从结构生物学（肽-HLA稳定性）到免疫学（TCR功能验证）的多层次研究设计。
   

其他重要发现

• KRASG12V[10]特异性TCR功能亲和力较低（EC50≈1.5 μM），提示9肽更适合作治疗靶点。
  
• HLA-A03超家族（如HLA-A*11:01）的共享结合基序可能拓展靶向人群。
  

此研究为KRAS突变实体瘤的精准免疫治疗提供了理论和实践基础，相关TCR专利已申请（未披露细节）。