用于靶向突变型钙网蛋白的单克隆抗体 INCA033989 在治疗髓系肿瘤中的研究进展

背景介绍：钙网蛋白突变驱动的骨髓增殖性肿瘤

骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative neoplasms，简称 MPN）是一类由多能造血干细胞（Hematopoietic stem cells, HSCs）发生体细胞突变引起的血液恶性疾病，其中突变主要影响 JAK2、CALR（钙网蛋白，Calreticulin）和 MPL 基因。MPN 包括真性红细胞增多症（Polycythemia Vera, PV）、原发性骨髓纤维化（Myelofibrosis, MF）和原发性血小板增多症（Essential Thrombocythemia, ET）。根据文献报道，钙网蛋白突变（mutCALR）是仅次于 JAK2 突变的第二大驱动因素，常见于约 35% 的 MF 患者和 25% 的 ET 患者，突变性钙网蛋白还与较高的造血克隆扩增、血栓形成风险以及骨髓纤维化进展密切相关。

现有针对 MPN 的治疗手段（如 JAK1/2 抑制剂 ruxolitinib）主要旨在缓解症状或抑制脾大，但无法显著减少突变型克隆负荷，亦即无法彻底根除该病。此外，化疗药物耐药性和药物不耐受率较高，大大限制了其疗效。因此，能选择性靶向 mutCALR 的疗法被认为是该领域亟需的新突破。

针对这一问题，来自 Incyte Research Institute 与法国 Gustave Roussy 研究中心、巴黎萨克雷大学等机构的联合团队，开发了一种靶向 mutCALR 的单克隆抗体 INCA033989，以期验证其对相关 MPN 的疗效。论文于 2024 年发表在《Blood》上，文章首次揭示了 INCA033989 的体内外机制与治疗潜力。

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研究设计与技术方法

研究总体设计

本研究基于多项技术手段，全面揭示了 INCA033989 在体外和体内模型中的功能。研究总体流程包括： 1. 抗体筛选与鉴定：通过突变型钙网蛋白结合肽段从抗体文库中筛选高亲和力抗体； 2. 体外药理评估：验证 INCA033989 针对突变型细胞的选择性结合与抗癌活性； 3. 体内模型验证：利用小鼠造血竞争性移植模型探讨抗体的治疗潜力及分子机制。

抗体筛选与特性分析

研究团队采用表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）技术，发现 INCA033989 能特异性结合 CALR 的突变末端新抗原区域，其与 CALRdel52 和 CALRins5 突变体的解离常数（Kd）分别为 1.75 nM 和 6.78 nM，表明其对 CALRdel52 变异体具有更高的亲和力。独特性分析表明，该抗体选择性结合 mutCALR，但对野生型钙网蛋白（wtCALR）无作用。

体外细胞系与原代细胞实验

研究在两种 ERK-JAK-STAT 信号通路活跃的造血细胞系（Ba/F3 和 UT-7）中，分别建立了突变型 CALR 和对照组细胞模型。结果显示： - INCA033989 能显著抑制 tpoR/CALR 突变致病复合物引发的 pSTAT5、pSTAT3 等信号通路激活作用。 - 细胞增殖实验表明该抗体能以剂量依赖性的方式选择性杀伤携带 CALRdel52 或 CALRins5 突变的细胞，而不会影响野生型细胞。

此外，还对携带钙网蛋白突变的人类原代造血干细胞（CD34+ HSPCs）进行测试，表明 INCA033989 在体外可有效杀伤携带突变的病变祖细胞，抑制其分化为巨核细胞，同时保留正常造血功能。

体内竞争性移植模型

为进一步验证 INCA033989 的疗效，研究利用 tamoxifen 诱导的 CALRdel52 小鼠模型开展竞争性造血移植实验： - 小鼠使用 INCA033989 后，血液和骨髓分析显示该抗体能显著降低突变型血小板比例至 36%，而对照组为 96%。治疗结束后诱导的突变克隆没有观察到复发。 - 骨髓分析还揭示，INCA033989 选择性减少了突变型长寿命造血干细胞（LT-HSCs），而未损害野生型造血干细胞。

这些结果表明，INCA033989 可通过选择性清除承载突变克隆的造血干细胞，从而干预疾病根本驱动因素并防止病情复发。

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主要发现和机制阐释

研究结果与贡献

本研究初步建立了 INCA033989 的作用机制和治疗潜能： 1. 靶向机理：INCA033989 通过结合 mutCALR/tpoR 复合物并促进其内吞，抑制了致病信号通路和异常分化。 2. 选择性：它能够在不损害正常造血功能的前提下，清除致病突变 HSCs。 3. 临床潜力：与现有泛靶向药物不同，INCA033989 被认为可通过选择性减少 mutCALR 克隆负荷，实现真正意义上的疾病缓解甚至根治。

学术亮点

该研究的学术和临床亮点包括： 1. 全球首个 mutCALR 靶向抗体：为 CALR 突变相关 MPN 的治疗带来革新路径； 2. 体外/体内多模型验证：使用患者来源的 CD34+ HSPCs 及小鼠模型，验证了特异性与疗效； 3. 非传统抗癌模式：通过抗体介导内吞而非免疫效应杀伤，实现不损害正常细胞的精准治疗； 4. 疾病驱动因素干预：首次实现对致病造血干/祖细胞的有效清除，为 MPN 的治愈提供理论基础。

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研究意义与展望

本次研究的成果表明，INCA033989 可作为 MPN 治疗的潜在疾病修饰疗法，为基于分子突变的精准医学应用提供全新策略。特别是在钙网蛋白突变诱导的病理背景下，该药物显示了对高危/晚期患者的治疗价值。

未来，INCA033989 将进行 I 期临床试验，着力评估其在 ET 和 MF 患者中的安全性和疗效。同时，本研究也为开发其他突变靶向抗体（如针对 JAK2、MPL 突变）的新药研发提供了参考框架。

总结

INCA033989 是首个专门靶向突变型钙网蛋白的单克隆抗体，探索性研究表明其具有显著的抗肿瘤作用和未来临床转化潜力。该研究为 MPN 的个体化治疗奠定了坚实基础，并可能为血液病治疗带来突破性转机。 “`